SCIEX液相色谱串联质谱系统测定微量血中的脂溶性维生素

引言 
        脂溶性维生素(Liposoluble Vitamins) 包括维生素A、维生素D、 维生素E、维生素K，不溶于水而溶于脂肪及有机溶剂，由长的碳 氢链或稠环组成的聚戊二烯化合物。维生素是维持身体健康所必需 的一类有机化合物。这类物质在体内既不能是构成身体组织的原 料，也不是能量的来源，而是一类调节物质，在物质代谢中起重要 作用。维生素A：维持正常视觉，维持上皮细胞、组织完整，增强 机体免疫力，参与铁代谢；维生素E：抗氧化、清除自由基，保护 神经功能，增强机体免疫力，维持正常生育功能；维生素D：维持 骨骼发育，调节抗原提呈细胞的分化、淋巴细胞的增值，影响免疫 力、智力发育；维生素K：参与凝血因子的合成，参与骨钙素的合 成。 
        本方法采用液液萃取方法对生物样本进行前处理，然 后SCIEX液相色谱串联质谱系统系统，以待测目标物的同位素 标记物为内标，检测人血清中维生素A (VA)、25-羟基维生素 D2（25OHVD2）、25-羟基维生素D3（25OHVD3）、维生素E （VE）、维生素K1 (VK1)。

实验部分
        样品处理：向1.5 mL EP管中，依次加入10 μL内标工作液(表 2)、50 μL全血和140 μL甲醇；涡旋20秒，混匀；再加入0.6 mL正己 烷，3,000 r/min涡旋100 s，然后10,000 rpm离心3分钟；取离心后 的上清液，在氮气下吹干。残渣用100 μL 80%甲醇复溶、离心， LC-MS/MS进样20 μL分析。 

色谱条件：        
        色谱柱使用Phenomenex kinetex C18 column (50×3.0 mm, 2.6 μm）进行分离，流动相选用水（含0.1% 甲酸）作为A相，和 甲醇（含0.1% 甲酸）作为B相，柱温设为40 ℃，进样量为20 μL； 进行梯度洗脱，液相梯度见表2。
 

质谱条件：
        使用SCIEX TripleQuad™ 4500MD质谱系统。采用Heated Nebulizer（APCI）和多反应监测（Multiple Reaction Monitoring， MRM）模式进行质谱扫描。离子源参数：加热气（GS1）为 60 psi，脱溶剂气温度为550 ℃；气帘气（Curtain Gas，CUR） 为35 psi，碰撞气（Collision Gas，CAD）为6 psi；雾化器电流 （Nebulizer Current, NC)：5 μA。为了获取较好的稳定性和灵敏度，各化合物监测离子对的去簇电压（Declustering Potential， DP）和碰撞电压（Collision Energy，CE），目标物定量离子对、定 性离子对以及内标物监测离子对等参数均经过系统优化，离子对信 息见表3。
 

结果与讨论
        图1 VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和VK1在定量下限LOQ提 取离子流图。图2是人全血中VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和 VK1的提取离子流色谱图，峰型对称，响应良好。
        VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和VK1回归方程和线性范围见 表3，VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和VK1在相应的浓度范围内 线性良好，r均大于0.996。
 

        为了考察方法的重现性及准确性，分别进行VA、25OHVD2、 25OHVD3、VE和VK1的精密度(RSD)和准确度方法验证。从表4可以 看出，VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和VK1低、中、高浓度的精 密度均在10%以内，准确度均在88-108%之内。
 

总结
本方法使用SCIEX 高灵敏度和高稳定性的液相色谱串联质谱系 统，实现了同时检测人全血中VA、25OHVD2、25OHVD3、VE和 VK1浓度，本方法可对人全血中脂溶性维生素进行快速的定性和定 量分析。该方法具有线性好、准确度高等优点，且每个样本分析仅 需6.5 min，具有较高的分析通量。
 

来源：SCIEX中国公司